久久偷看各类WC女厕嘘嘘偷窃,久久久久精品,天天摸夜夜添狠狠添婷婷,国模叶桐尿喷337P人体

　　項目簡介

　　生物透射電鏡是觀察生物細胞樣品內部形態(tài)的重要工具，其電壓在80-120kv可以降低生物樣品因高能電子束輻射而損傷的影響，同時依賴于生物樣品制備技術的發(fā)展，如超薄切片技術、負染色技術、冷凍制樣技術、細胞化學技術等，廣泛應用于組織學、細胞學、病毒學、病理學及材料學等多個學科的研究中，一般用來觀察細胞整體結構、細胞膜細胞壁細胞器的變化、材料進入細胞內部的分布情況或者細胞應付外界刺激產生的自噬小體等結構，以及外界生物入侵的侵染結構等等。

　　結果展示

　　生物樣品透射電鏡取材注意事項

　　取材是電鏡實驗的第一步，其操作成功與否直接關系到電鏡結果的效果及成敗。為了得到好的結果，請務必按要求做好取材!取材基本要點：快(1min)、冷(4℃)、小(1 mm3)、凈(無雜質)、準(部位準確)。不同的樣品，取材細節(jié)上有很大區(qū)別!

　　(一)動物組織取材流程及要求

　　取材流程：動物麻醉或斷頭急性處死，解剖取出所需的器官或組織，生理鹽水簡單沖洗血液及組織液。按要求將組織切成1mm3左右小塊，固定于組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定液。

　　取材要求：

　　(1)位置：肝、肺、脾等無需定位組織取1mm3組織，3-5塊;需要定位組織如骨骼肌、腎、腸、血管、胰島等組織取材大小為0.5mm×1mm×3mm左右的長條狀，且保證觀察結構在組織塊中。

　　(2)操作：試劑、容器、器械提前4℃預冷;組織離體后，1min內浸入戊二醛固定液。取材時，可提前準備一個載玻片(硬卡紙)，滴幾滴戊二醛固定液，把標本浸在液滴中修整至合適大小(時間可稍長)，用牙簽挑出3～5粒標本，放入1.5ml尖頭EP管。將修整好的標本塊放入戊二醛固定液后，普通4℃冰箱保存。

　　(二)細胞取材流程及要求

　　取材流程：細胞直接刮下(不可胰酶消化，會造成細胞損傷)，細胞懸液離心，棄上清，PBS洗2次(敏感的細胞直接固定，不洗)，低速(1000-3000rpm)離心成團，加入組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定液4℃過夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到PBS中，后續(xù)操作一致。

　　取材要求：

　　(1)細胞數(shù)量充足(6cm或10cm皿長滿)，離心后在EP管中黃豆大小;

　　(2)緩沖液、戊二醛固定液等PH值7.3-7.4，4℃提前預冷;

　　(3)貼壁細胞連著培養(yǎng)基用細胞刮斜著快速刮下，不要反復來回刮;

　　(4)細胞懸液轉入離心管，1000-3000rpm離心成團，棄上清，加PBS，將細胞轉入1.5mL尖頭EP管，再次離心后棄上清。再加PBS重復上述步驟，z后加2.5%戊二醛固定，4℃保存。操作輕柔，盡量保證細胞不散開。(轉速及時間請結合細胞情況，盡量低轉速、短時間，以細胞離心成團為準!(PBS 清洗時間過長，易造成細胞損傷);

　　(三)植物組織取材及要求

　　取材流程：PBS沖洗樣品，確保無泥沙等污染物。然后用鋒利刀片或剪刀將樣品切成合適大小，裝入預冷的植物及細菌電鏡專用2.5%戊二醛中。不需要定位的樣品切成1立方毫米大小(如葉片、果實、花粉等)，需要定位的樣品，切成0.5mm×1mm×3mm的長條狀(莖、根、表皮等)隨后抽氣，讓組織能沉淀到管底。(簡易抽氣方法：將植物組織同固定液一起倒入注射器，用乳膠手套食指堵住注射器出口，右手拉動針栓，將注射器口垂直向上，松開食指，右手輕推針栓使液面上的氣泡從注射器口排出，反復多次，直至組織沉入固定液。)

　　(四)其他樣品

　　懸浮細胞、細菌可視為細胞懸液操作。固體培養(yǎng)的細菌，可視為被切小的組織塊，直接用牙簽挑取3-5個菌落即可。外泌體、納米材料、脂質體、病毒顆粒等負染樣品，不需要固定，新鮮樣本保持低溫運送。

　　(五)樣本儲存運輸標準：

　　儲存：樣本取材后，4℃保存時間不超過1個月。

　　運輸：固定液充滿EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個(-20℃冰袋，不要太多)，一定要與樣品隔開。特殊樣品如脂肪、植物等用紗布將樣品壓到液面以下，保證充分固定。(見下圖)

　　參考圖：

　　常見問題

　　1.植物的根部為什么有時看不到細胞核?

　　植物細胞的細胞核相對比較小，不好切，切片的時候有可能沒有切到，所以在觀察透射電鏡的時候會發(fā)現(xiàn)看不到細胞核。

　　2.切片染色的目的是什么?

　　由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等輕元素組成。這些元素原子對電子的散射能力很弱，相互之間的差別也很小。尤其生物超薄切片被樹脂所包埋，這些包埋樹脂對電子的散射能力與樣品本身差別很小。因此生物樣品超薄切片觀察時像的反差極弱。

　　為了提高圖像的反差，要對超薄切片進行電子染色。這里所謂電子染色是根本不同于光學顯微鏡的染色，它是利用重金屬鹽(如鉛鹽、鈾鹽等)與細胞的某些成分或結構結合，由于重金屬對電子散射能力很強，使那些與其結合的結構或成份對電子散射能力增強，從而達到提高樣品本身反差的。目前常用的染色劑是醋酸鈾和檸檬酸鉛染色液。

　　3.2.5%戊二醛固定液如何配置?

　　市售25%戊二醛水溶液 10ml

　　0.2M磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 50ml

　　蒸餾水加至 100ml