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　　土壤酶是土壤中重要的生物活性物質(zhì)，參與有機(jī)質(zhì)的分解和養(yǎng)分循環(huán)。常見的土壤酶包括脲酶、磷酸酶、蔗糖酶、過氧化氫酶等。以下是幾種常見土壤酶活性的檢測方法：

　　1. 脲酶活性測定

　　原理：脲酶催化尿素水解生成氨和二氧化碳，通過測定氨的生成量來反映脲酶活性。

　　試劑與材料：

　　尿素溶液(10%)

　　檸檬酸緩沖液(pH 6.7)

　　苯酚-次氯酸鈉試劑

　　分光光度計(jì)

　　操作步驟：

　　樣品處理：取1g土壤，加入2mL尿素溶液和1mL檸檬酸緩沖液，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。

　　顯色反應(yīng)：加入5mL苯酚-次氯酸鈉試劑，靜置20分鐘。

　　測定吸光度：在625nm波長下測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算氨的生成量。

　　計(jì)算：

　　脲酶活性(mg NH??-N/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：氨濃度(mg/mL)

　　V：反應(yīng)體積(mL)

　　T：反應(yīng)時(shí)間(h)

　　W：土壤重量(g)

　　2. 磷酸酶活性測定

　　原理：磷酸酶催化有機(jī)磷化合物水解生成無機(jī)磷，通過測定無機(jī)磷的生成量來反映磷酸酶活性。

　　試劑與材料：

　　對硝基苯磷酸二鈉(PNPP，底物)

　　Tris-HCl緩沖液(pH 6.5)

　　氫氧化鈉(NaOH)

　　分光光度計(jì)

　　操作步驟：

　　樣品處理：取1g土壤，加入1mL PNPP溶液和2mL Tris-HCl緩沖液，37℃培養(yǎng)1小時(shí)。

　　終止反應(yīng)：加入1mL NaOH溶液(0.5mol/L)。

　　測定吸光度：在405nm波長下測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算無機(jī)磷的生成量。

　　計(jì)算：

　　磷酸酶活性(μmol PNP/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：對硝基苯酚(PNP)濃度(μmol/mL)

　　V：反應(yīng)體積(mL)

　　T：反應(yīng)時(shí)間(h)

　　W：土壤重量(g)

　　3. 蔗糖酶活性測定

　　原理：蔗糖酶催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，通過測定還原糖的生成量來反映蔗糖酶活性。

　　試劑與材料：

　　蔗糖溶液(8%)

　　磷酸緩沖液(pH 5.5)

　　3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑

　　分光光度計(jì)

　　操作步驟：

　　樣品處理：取1g土壤，加入1mL蔗糖溶液和2mL磷酸緩沖液，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。

　　顯色反應(yīng)：加入1mL DNS試劑，沸水浴5分鐘，冷卻后稀釋。

　　測定吸光度：在540nm波長下測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖的生成量。

　　計(jì)算：

　　蔗糖酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：葡萄糖濃度(mg/mL)

　　V：反應(yīng)體積(mL)

　　T：反應(yīng)時(shí)間(h)

　　W：土壤重量(g)

　　4. 過氧化氫酶活性測定

　　原理：過氧化氫酶催化過氧化氫分解生成水和氧氣，通過測定過氧化氫的消耗量來反映過氧化氫酶活性。

　　試劑與材料：

　　過氧化氫溶液(0.3%)

　　磷酸緩沖液(pH 7.0)

　　硫酸(H?SO?)

　　高錳酸鉀溶液(0.02mol/L)

　　滴定管

　　操作步驟：

　　樣品處理：取1g土壤，加入5mL過氧化氫溶液和5mL磷酸緩沖液，室溫反應(yīng)30分鐘。

　　終止反應(yīng)：加入5mL硫酸溶液(1mol/L)。

　　滴定：用高錳酸鉀溶液滴定剩余的過氧化氫，記錄消耗量。

　　計(jì)算：

　　過氧化氫酶活性(mL 0.02mol/L KMnO?/g·h)= (V? - V) / (T × W)

　　V?：空白滴定消耗的高錳酸鉀體積(mL)

　　V：樣品滴定消耗的高錳酸鉀體積(mL)

　　T：反應(yīng)時(shí)間(h)

　　W：土壤重量(g)

　　5. 纖維素酶活性測定

　　原理：纖維素酶催化纖維素水解生成還原糖，通過測定還原糖的生成量來反映纖維素酶活性。

　　試劑與材料：

　　羧甲基纖維素鈉(CMC，底物)

　　醋酸緩沖液(pH 5.0)

　　DNS試劑

　　分光光度計(jì)

　　操作步驟：

　　樣品處理：取1g土壤，加入1mL CMC溶液和2mL醋酸緩沖液，50℃培養(yǎng)24小時(shí)。

　　顯色反應(yīng)：加入1mL DNS試劑，沸水浴5分鐘，冷卻后稀釋。

　　測定吸光度：在540nm波長下測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖的生成量。

　　計(jì)算：

　　纖維素酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

　　C：葡萄糖濃度(mg/mL)

　　V：反應(yīng)體積(mL)

　　T：反應(yīng)時(shí)間(h)

　　W：土壤重量(g)