400-009-7767
項目簡介
生物透射電鏡是觀察生物細胞樣品內(nèi)部形態(tài)的重要工具，其電壓在80-120kv可以降低生物樣品因高能電子束輻射而損傷的影響，同時依賴于生物樣品制備技術(shù)的發(fā)展，如超薄切片技術(shù)、負染色技術(shù)、冷凍制樣技術(shù)、細胞化學(xué)技術(shù)等，廣泛應(yīng)用于組織學(xué)、細胞學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)及材料學(xué)等多個學(xué)科的研究中，一般用來觀察細胞整體結(jié)構(gòu)、細胞膜細胞壁細胞器的變化、材料進入細胞內(nèi)部的分布情況或者細胞應(yīng)付外界刺激產(chǎn)生的自噬小體等結(jié)構(gòu)，以及外界生物入侵的侵染結(jié)構(gòu)等等。
結(jié)果展示
生物樣品透射電鏡取材注意事項
取材是電鏡實驗的第一步，其操作成功與否直接關(guān)系到電鏡結(jié)果的效果及成敗。為了得到好的結(jié)果，請務(wù)必按要求做好取材！取材基本要點：快（1min）、冷（4℃）、小（1 mm3）、凈（無雜質(zhì)）、準（部位準確）。不同的樣品，取材細節(jié)上有很大區(qū)別！
（一）動物組織取材流程及要求
取材流程：動物麻醉或斷頭急性處死，解剖取出所需的器官或組織，生理鹽水簡單沖洗血液及組織液。按要求將組織切成1mm³左右小塊，固定于組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定液。
取材要求：
（1）位置：肝、肺、脾等無需定位組織取1mm³組織，3-5塊；需要定位組織如骨骼肌、腎、腸、血管、胰島等組織取材大小為0.5mm×1mm×3mm左右的長條狀，且保證觀察結(jié)構(gòu)在組織塊中。
（2）操作：試劑、容器、器械提前4℃預(yù)冷；組織離體后，1min內(nèi)浸入戊二醛固定液。取材時，可提前準備一個載玻片（硬卡紙），滴幾滴戊二醛固定液，把標(biāo)本浸在液滴中修整至合適大?。〞r間可稍長），用牙簽挑出3～5粒標(biāo)本，放入1.5ml尖頭EP管。將修整好的標(biāo)本塊放入戊二醛固定液后，普通4℃冰箱保存。
（二）細胞取材流程及要求
取材流程：細胞直接刮下（不可胰酶消化，會造成細胞損傷），細胞懸液離心，棄上清，PBS洗2次（敏感的細胞直接固定，不洗），低速（1000-3000rpm）離心成團，加入組織及細胞電鏡專用2.5%戊二醛固定液4℃過夜后快遞。懸浮細胞、菌液可直接視為細胞懸浮液操作。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到PBS中，后續(xù)操作一致。
取材要求：
（1）細胞數(shù)量充足（6cm或10cm皿長滿），離心后在EP管中黃豆大??；
（2）緩沖液、戊二醛固定液等PH值7.3-7.4，4℃提前預(yù)冷；
（3）貼壁細胞連著培養(yǎng)基用細胞刮斜著快速刮下，不要反復(fù)來回刮；
（4）細胞懸液轉(zhuǎn)入離心管，1000-3000rpm離心成團，棄上清，加PBS，將細胞轉(zhuǎn)入1.5mL尖頭EP管，再次離心后棄上清。再加PBS重復(fù)上述步驟，最后加2.5%戊二醛固定，4℃保存。操作輕柔，盡量保證細胞不散開。(轉(zhuǎn)速及時間請結(jié)合細胞情況，盡量低轉(zhuǎn)速、短時間，以細胞離心成團為準?。≒BS 清洗時間過長，易造成細胞損傷)；
（三）植物組織取材及要求
（四）其他樣品
懸浮細胞、細菌可視為細胞懸液操作。固體培養(yǎng)的細菌，可視為被切小的組織塊，直接用牙簽挑取3-5個菌落即可。外泌體、納米材料、脂質(zhì)體、病毒顆粒等負染樣品，不需要固定，新鮮樣本保持低溫運送。
（五）樣本儲存運輸標(biāo)準：
儲存：樣本取材后，4℃保存時間不超過1個月。
運輸：固定液充滿EP管，封口膜封口，氣泡膜或報紙包裹厚一些。最后泡沫盒+冰袋的方式運輸，冰袋2-3個（-20℃冰袋，不要太多），一定要與樣品隔開。特殊樣品如脂肪、植物等用紗布將樣品壓到液面以下，保證充分固定。（見下圖）
參考圖：
常見問題
1.植物的根部為什么有時看不到細胞核？
植物細胞的細胞核相對比較小，不好切，切片的時候有可能沒有切到，所以在觀察透射電鏡的時候會發(fā)現(xiàn)看不到細胞核。
2.切片染色的目的是什么？
由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等輕元素組成。這些元素原子對電子的散射能力很弱，相互之間的差別也很小。尤其生物超薄切片被樹脂所包埋，這些包埋樹脂對電子的散射能力與樣品本身差別很小。因此生物樣品超薄切片觀察時像的反差極弱。
為了提高圖像的反差，要對超薄切片進行電子染色。這里所謂電子染色是根本不同于光學(xué)顯微鏡的染色，它是利用重金屬鹽（如鉛鹽、鈾鹽等）與細胞的某些成分或結(jié)構(gòu)結(jié)合，由于重金屬對電子散射能力很強，使那些與其結(jié)合的結(jié)構(gòu)或成份對電子散射能力增強，從而達到提高樣品本身反差的。目前最常用的染色劑是醋酸鈾和檸檬酸鉛染色液。
3.2.5%戊二醛固定液如何配置？
市售25%戊二醛水溶液 10ml
0.2M磷酸鹽緩沖液（pH7.0） 50ml
蒸餾水加至 100ml
